Coriell Institute細(xì)胞的實(shí)驗注意事項和培養(yǎng)操作介紹

　　Coriell Institute細(xì)胞凍存和復(fù)蘇實(shí)驗原理：細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，可以保存細(xì)胞活力，目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。

        細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細(xì)胞造成損傷。

　　一、細(xì)胞凍存和復(fù)蘇實(shí)驗注意事項：

　　1、從增殖期到形成致密的單層細(xì)胞以前的培養(yǎng)細(xì)胞都可以用于凍存。

　　2、將凍存管放入液氮容器或從中取出時，要做好防護(hù)工作，以免凍傷。

　　3、凍存和復(fù)蘇用新配制的培養(yǎng)液。

　　二、Coriell Institute細(xì)胞培養(yǎng)操作：

　　1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜，換液并檢查細(xì)胞密度。

　　2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

　　3、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

　　4、加1ml消化液于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

　　5、按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

　　6、待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。